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液相色谱仪脱气、过滤、冲洗三步很重要

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浏览:次 2017-05-21 22:19:21

液相色谱仪脱气、过滤、冲洗三步很重要 液相色谱仪脱气、过滤、冲洗三步很重要 液相色谱仪分析最重要的有3点:脱气、过滤和冲洗。大家1起来学习下这3步的注意事项。1、脱气 活动相脱气可以免液相色谱系统出问题,从而顺利得到理想的数据。HPLC系统内是不希翼有气泡存在的。HPLC泵在输送液体时要产生很大的气力,由于气体的紧缩比与液体相比大的多,因此当气泡存在时,你将视察到瞬间的流速下降和系统压力降落。如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡,而也有1些泵设计当气泡存在时将停止运转。 当1个气泡通过输液泵时,由于系统压力大,气泡通常会溶解在活动相溶液中,随活动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压,因此气泡可能在检测器流通池中又显现,在色谱图上会出现不规律的毛刺。 紫外/可见光(UV/VIS) 液相色谱仪分析最重要的有3点:脱气、过滤和冲洗。大家1起来学习下这3步的注意事项。
1、脱气
活动相脱气可以免液相色谱系统出问题,从而顺利得到理想的数据。HPLC系统内是不希翼有气泡存在的。HPLC泵在输送液体时要产生很大电动拉力试验机的气力,由于气体的紧缩比多功能臭氧试验机与液体相比大的多,因此当气泡存在时,你将视察到瞬间的流速下降和系统压力降落。如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡,而也有1些泵设计当气泡存在时将停止运转。
当1个气泡通过输液泵时,由于系统压力大,气泡通常会溶解在活动相溶液中,随活动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压,因此mld10磨料磨损试验机气泡可能在检测器流通池中又显现,在色谱图上会出现不规律的毛刺。
紫外/可见光(UV/VIS)检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征象。另外,dze50液压数字式砖瓦抗折试验机对利用待测物资在电极表面产生氧化还原反应引发电流变化而进行检测的电化学(EC)检测器,对活动相中的溶解氧的存在也非常灵敏。另外,气泡的存在有时还会致使保存时间不重现。
所以,必须注意消除活动相中的空气,并且还应避免空气由管路(如PTFE管)渗透进活动相中。
经常使用的脱气方法
1. 吹水泥胶砂电动抗折试验机氦脱气法。利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性,在0.1MPa压力下,以约60 mL/min流速通入活tye2000b型二三轮曲绕试验机压力试验机动相储液容器中10~15min,可以很有效地从活动相中排除溶解的空气,能排除接近80%的氧气。采取1个30t拉伸试验机高效散布式喷射流装置,1体积的氦气可从活动相中将等体积的几近全部气体排除。这意味着1L氦气通过1L活动相便可完成排气这个工作。这类脱气方法虽然好,但大家国内氦气价格较高,很少有实验室采取此方法。
2抽真空脱气法。此法可以使用真空泵,降压至0.05~0.07MPa便可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成产生变化,从而影响到实验的重现性,因此多用于单溶剂体系的简单分析。
3. 在线脱气法。现在商品的HPLC仪器,都可配在线脱气机。在线脱气使用简单,低故障,有效。建议购买仪器时1定要购买,有的公材料性能试验机司是作为选购件,所以与仪器企业谈配置时应与企业确认。
4. 超声大型疲劳试验机波脱气法。将欲脱气的活动相置于超声波清洗器中,用超声波震荡10~20min。此法的脱气效果最差。
5. 加热回流法。此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效力,否则溶剂会丢失,混合活动相的比例会有变化。
2、过滤
任何颗粒物进入HPLC系统后都会在柱子入口端被筛板挡住,最后的结果是将柱子梗塞,表现出的特点是系统压力增加并使色谱峰变形。因此,要采取各种预防措施,包括操作步骤和商品仪器本身的各铜棒拉力试验机种过滤设漏电起痕试验机计,努力避免或减少颗粒物进入HPLC系统中,从而延长仪器和色谱柱的使用寿命,并提高数据的可靠性。在HPLC系统中,颗粒物的主要来源有3个途径:活动轮胎六分力试验机相、被测样品和仪器系统部件的磨损物。
1、活动相
如果活动相均由高效液相色谱级溶lat100磨耗试验机剂组成,活动相没有必要过滤。这是由于高效液相色谱级的有机溶剂,例如乙腈、甲醇等,在制造的工艺进程中都已过了0.2 μm微孔滤膜过滤。一样的,不管你是买的HPLC级的水还是在实验室使用超纯水净化系统制备的水,最后1步也是通过0.2 μm微孔滤膜。但是,如果有任何1种缓冲液中加入了固体物,例如磷酸盐,活动相过拉力试验机滤将是必要的1个步骤。虽然缓冲盐多是可溶解的、高纯的,但它还是可能含有颗粒物资,例如在盖试剂瓶的塑料内盖时,电子压力试验机塑料瓶盖子与瓶口边沿挤压就会产生塑料颗粒。在这类情况下,添加的1种固金属跌落试验机体物可能完全缺口冲击试验机溶解了,但是少许杂质颗粒存在于活动相中成为残渣。
活动相通过0.45 μm微孔滤膜过滤对从活动相中除去所有颗粒物是1个有效方法。0.2 μm微孔滤膜也能够用,但是它们就这个利用而言其实不比0.45μm微孔滤膜更有效,而且它的过滤速度会更慢,特别是当实验室使用的试剂和水的质量不太好时。建议实验室在编写制定他们活动相制备标准操作程序(SOPs)时规定,可以鉴戒国际上同类实验室钢管水压试验机的规手动拉力试验机定,即:
活动相制备仅采取HPLC级液体时不需要过滤,反之所有活动相组成在使用前必须过滤。
在连接储液瓶和泵的输液管的末端入口采取下沉式过滤器(常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种)也是很重要的。这个过滤器的规格为≥10 μm的微孔物资,所以它不能取代活动相过滤步骤,但电力安全工具拉力试验机是它能除去系统中的尘土并保证储液瓶、输液管使用的可靠性。
2、被测样品
液相系统中的第2个颗粒物来源是被测样品。1些实验室在将他们的样品放置在自动进样器盘(或手动进样)之前,所有样品都先通过1个0.45 μm针筒式过滤器过滤。这是1个有效除去被测样品中颗粒物的方法。但是这个进程也有1点需要关注:你使用了针筒式过滤器就不可能100%得到通过过滤器的被测样品,总会有或多或少的丢失。丢失来自这样几方面:过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器ff14高机动型纸袋耐磨试验机试验机与针筒连接处的渗漏等。如果有丢失,过滤后液体中被测物的含量或浓度与原基本样液的含量或浓度还相同吗?这个问题1般电源插头突拉试验机需要通过实验确认。确认这步是要增加工作量和费用鞋材吐霜试验机的。过滤器的使用是1种消耗,每一个过滤器的价格从几元到10几元。但在做食品中残留物分析时,由于基质大多比较复杂,所以过滤这步已成为不可或缺的1步。在实际分析工作中,1般检测每组样品会带1个外标、1个添加回收或是质控样品,所以,只要终究检测时得到的信噪比能满足检出限要求,可将这步视为系高温老化试验机统误差而疏忽。

3、仪器系统部件的磨损物
最后,在HPLC系统中颗粒物的另外一个主要来源是输液泵密封垫和进样阀旋转轴的磨损。关于输液泵密封垫的磨损更换有两种不同建议。
第1种建议认为,在1般实验室中输液泵密封垫通常使用寿命为6个月到1年,因此建议半年或1年更换这些密封垫,实验室应基于上述观点制定定期预防性保护计划。该观点认为:与输液泵密封垫颗粒梗塞柱子而更换紫外光加速老反复压缩试验机化试验机新柱胶粘剂剪切强度试验机子的费用相比,更换密封垫的费用低些。1些输液泵有玻璃砂芯或筛网,可在流路中滤掉从泵密封垫磨损下来的颗粒物,避免这些颗粒物随活动相流至柱头。若有这类装置应查阅输液泵操作手册,查看推荐的这类过滤器清洗或更换的间隔。
另外一种建议则认为,原装密封垫的密封效果最好,更换以后容易引发活动插件插拔试验机相渗漏。所以,只要不漏液就不要轻易更换密封垫。
3、冲洗
使HPLC系统良好运行的第轴瓦试验机3个要点是保持系统的清洁。你需要关注活动相流经该系统的所有地方,对这些地方常常性的冲洗,将使你的系统保持在&ld球盘式摩擦磨损试验机quo;Ready”状态。
1、活动相储液瓶
首先要常常清洗活动相储液瓶,或每高达试验机做1批新样品更换1次活动相。1个脏的储液瓶将会污染注入的活动相。建议储液瓶中缓冲液使用时间不要超过1周,而有机溶剂使用时间不要超过1个月。也有人建议储液瓶中保持用溶剂充满,直到更换分析方法储液瓶需更换新溶剂(活动相组成产生变化)时,将旧溶剂倒掉更换新溶剂,这样胜于将溶剂用完。但这对分析样品量少的实验室而言仿佛有些浪费。建议储水瓶的水要床垫滚筒耐久试验机每天换,每周瓶子还应当用异丙醇清洗1次。有的实验室则在水里加入0.1~1 mM的甲酸抑制微生物的拉伸试验机生长。这些做法看起来有些繁琐,但却能起到“磨刀不误砍柴工”作用。
2、泵
接下来要冲洗的是泵。千万不要1分析完冲几分钟后橡胶可塑度试验机就停泵,特别是当活动相中含有难挥发的缓冲液(如磷酸盐)时。安全帽冲击穿刺试验机如果仪器不是连续使用,当活动相蒸发时,难挥发物就会粘在活塞密封垫拉压弹簧试验机的表面,难挥发物将构成固形物沉淀。这是泵密封垫磨损和单向阀渗漏的主要缘由之1。所以,不管使用长短,在停泵之前1定要用非缓冲液活动相冲洗泵在半个小时以上,要是活动相中有难挥发缓冲盐则建议冲洗的时间应当更长些。
3、自动进样器
自动进样器也要按规定清洗。现在的仪器多配有自动进样器的冲洗液瓶,通常只要注意及时更换、补充冲洗液便可。自动进样器用的洗涤液也要采取与活动相相同的方式处理弯曲强度试验机,并根据溶剂的有效期和规定,清洗储液瓶或更换洗涤液。现在的自动进样器设置、操作都很简单,如果时间允许(特别是利用夜间运行),每次分析完后设置进1、2针纯溶剂(如甲醇、乙腈),也是1个好做法。
4、色谱柱
对柱子的污染是随使用时间而增加。通常表现是:运行走基线时在记录的色谱图中基线噪音增加,泵压也增加。解决这个问题的最有效方法就是在每批样品分析结束后或准备卸下柱子时用大量的活动相冲洗柱子(例如,甲高低温循环试验机醇、乙腈和水)钢管脉冲试验机。用梯度冲洗效果更好,具体的比例要根据柱子的说明书和性质而定。
5、检测器
如果是正常使用,检测器将根据其性质并依照说明书规定进行洗。例如UV/VIS检测器或FL检测器,在对柱子和系统进行冲洗时也就1同对检测器流通池中污染物进行了清洗。但是蒸发光检测器或质谱仪则需要依照说明书进行定期清洗。这些检测器在使用时会有难挥发污染物沉积,如质谱仪离子源的喷针、毛细管、锥孔板、预4极等部件,因此需要定期清洗。而且对联有这些检测器的系统冲洗时,最好与这些检测器断开,以减少对检测器的污染。
总之,合金材料高温抗压试验机实验室平常使用的液相色谱仪要是能认真做好这3项工作——脱气、过滤和冲洗,你的仪器可以得到良好的预防性保护,使用时就会感到比较顺手。固然,在实际操胶带持粘性试验机作时遇到的问题并没有这么简单,但这3个良好习惯将是正确操作、使用HPLC系统的基础。

来源:实验与分析
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